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鬼筆環肽染色原理(Alexa Fluor 488 標記鬼筆環肽使用方法)

更新時間:2024-10-15      點擊次數:346

鬼筆環肽是一種雙環七肽毒素,它能選擇性的與動植物體內的纖維狀的肌動蛋白 (F-actin) 結合,這種特殊的選擇性使之成為研究細胞內肌動蛋白微絲 (F-actin) 的有力工具。在光學顯微鏡下, 熒光標記過的鬼筆環肽 (phalloidin-dye conjugate) 可以清晰地顯示出細胞內微絲的形態和分布,廣泛被應用于生物醫學的研究當中。

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鬼筆環肽染色原理

熒光標記的鬼筆環肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結合并且易溶于水,為檢測組織切片,培養細胞和無細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。通過其熒光特性,在特定波長光的激發下發出熒光,使得細胞內肌動蛋白絲的結構和分布清晰可見。
鬼筆環肽使用方法

以Alexa Fluor 488 標記鬼筆環肽(綠色)為例

第1:準備1× Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽工作液吸取1 μL 1000×Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽存儲液到1 mL 含有1% BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

第2:細胞染色步驟

(1) 細胞培養過夜或更長,使其密度達到50~60% 匯合度。

(2) 吸掉培養液,37℃ 預熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細胞2次。

(3) 使用含有3-4% 甲醛的PBS溶液進行細胞固定,室溫固定10~30 min。

(4) 室溫條件下,用PBS清洗固定好的細胞2~3次,每次10 min。

(5) (可選):室溫條件下,用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3~5 min,從而增加其通透性。

(6) 室溫條件下,用PBS清洗細胞2~3次,每次10 min。

(7) 每孔加入 Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽工作液100 μL /孔(96孔板),室溫避光染色20~90 min,夏季時間相對短些。

(8) 用PBS清洗細胞3次,每次5 min,去除掉多余的Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽。

(9) (可選):加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進行復染,如:100 μL /孔(96孔板),室溫3~5 min。用PBS清洗細胞2次,每次5 min。

(10)  于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察,選擇Alexa FluorTM 488激發/發射濾片和/或DAPI激發/發射濾片(Ex/Em=364/454nm)。
鬼筆環肽注意事項

? 儲存條件:鬼筆環肽及其熒光標記衍生物應儲存在-20℃以下,保持干燥并避光。

? 細胞處理:在進行鬼筆環肽染色前,細胞應經過適當的固定和滲透處理,以確保染色效果。

? 熒光顯微鏡設置:根據所使用的熒光標記鬼筆環肽的激發和發射波長,調整熒光顯微鏡的設置以獲得最佳的觀察效果。

? 不同的細胞染色情況不同,相應Alexa Fluor鬼筆環肽使用量也需根據不同情況而定。

? 毒性較大,需帶上手套操作

? 避免固定劑中含有甲醇成分,因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

488綠色鬼筆環肽產品推薦

[品牌]  和元李記

[產品]  488 標記鬼筆環肽(綠色)

[貨號]  AC18L032

[規格]   300T


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