在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域,細(xì)胞是重要的研究對象,尤其是原代細(xì)胞——直接從活體組織中提取的未經(jīng)過人工傳代培養(yǎng)的細(xì)胞,更是珍貴的實驗資源。然而,如何在保證細(xì)胞活性的同時進(jìn)行長期儲存,成為了科研工作者面臨的重大挑戰(zhàn)之一。這時,“原代細(xì)胞凍存液”應(yīng)運而生,它不僅解決了這一難題,還極大地推動了細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展進(jìn)程。
原代細(xì)胞凍存液是一種專門用于低溫條件下保護(hù)細(xì)胞免受冷凍傷害的特殊溶液。其核心成分主要包括:
DMSO(二甲基亞砜):作為一種滲透性抗凍劑,DMSO能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,替代水分子,防止冰晶形成,減少細(xì)胞膜損傷。
血清蛋白:如胎牛血清,提供必要的營養(yǎng)支持,幫助細(xì)胞抵御外界環(huán)境壓力,增強(qiáng)生存能力。
抗生素:如青霉素和鏈霉素,預(yù)防可能由微生物污染引起的細(xì)胞死亡。
這些成分協(xié)同作用,共同構(gòu)建起一個安全穩(wěn)定的“冬眠環(huán)境”,使細(xì)胞能夠在零下196℃的液氮環(huán)境中長時間休眠而不喪失活性。
正確使用原代細(xì)胞凍存液,需要遵循一套標(biāo)準(zhǔn)化操作流程:
準(zhǔn)備階段:選擇合適的凍存液配比,根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整DMSO濃度(一般5%-10%),并在無菌環(huán)境下混合均勻。
細(xì)胞處理:收集生長良好的原代細(xì)胞,離心去除舊培養(yǎng)基后,用預(yù)冷的PBS緩沖液洗滌一次,再加入適量凍存液重懸。
降溫程序:將裝有細(xì)胞懸浮液的凍存管放入溫度遞減的程序冷卻盒中,以每分鐘約1℃的速度緩慢降至-80℃,之后轉(zhuǎn)移至液氮罐內(nèi)長期儲存。
復(fù)蘇過程:快速將凍存管浸入37℃溫水中解凍,并立即離心清洗,去除殘留的DMSO,重新接種于新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。
值得注意的是,在整個操作過程中,嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則至關(guān)重要,以防任何外來污染影響細(xì)胞的后續(xù)應(yīng)用價值。
原代細(xì)胞凍存液的應(yīng)用,不僅限于實驗室內(nèi)的細(xì)胞保存,它還是生物樣本庫建設(shè)、疾病模型構(gòu)建以及藥物篩選平臺開發(fā)的基礎(chǔ)支撐。隨著單細(xì)胞測序、基因編輯等先進(jìn)技術(shù)的融合應(yīng)用,凍存后的原代細(xì)胞有望提供更多層次、更高分辨率的生命信息解讀,助力人類深入理解復(fù)雜疾病的發(fā)病機(jī)制,加速新藥研發(fā)進(jìn)度。